Formación de esferoides en miniatura en placas de 384 pocillos
Los cultivos 3D se han convertido en una herramienta vital en la investigación relacionada con tumores y el descubrimiento de fármacos. Los cultivos 3D de líneas celulares tumorales tienen notables similitudes estructurales y fisiológicas con los tumores sólidos in vivo. Los esferoides de las células cancerosas pueden imitar las complejas estructuras in vivo de los tumores, las interacciones entre células, las zonas de células proliferantes y quiescentes y los gradientes de oxígeno y nutrientes, en comparación con los cultivos 2D tradicionales. Por lo tanto, los esferoides se consideran un modelo relevante para estudios fisiopatológicos de tumores, así como para pruebas de eficacia y toxicidad de fármacos (1).
Cultivos de esferoides para detección de alto rendimiento (HTS)
La mayoría de los protocolos de esferoides estandarizados se han optimizado para su uso en la detección de alto rendimiento/alto contenido. Sin embargo, todavía se están realizando muchas mejoras para reducir la variabilidad entre pozos en el tamaño y la forma de los esferoides. La superposición líquida, las placas recubiertas de agarosa y las placas de fijación baja son formas comunes de técnicas de cultivo de esferoides (4). Estos métodos son de bajo costo, baja tecnología y fácilmente adaptables desde placas multipocillos estándar hasta placas de microtitulación. La formación de esferoides en placas de 96 pocillos y en placas de 384 pocillos ha demostrado ser eficaz en su uso en HTS (4,5). Aunque el efecto de borde es un desafío común, se supera fácilmente con condiciones de cultivo mejoradas que previenen la pérdida de medio y reducen la variabilidad entre pozos (1-3,6-8).
Formación de esferoides en placas de 384 pocillos de baja fijación
Para avanzar en los métodos de formación de esferoides en miniatura redondos y sin andamios, Facellitate™ lanzó sus propias placas de 384 pocillos de fijación baja. Estas placas están recubiertas con un recubrimiento de polímero especializado que hace que la superficie de la placa sea repelente de células, lo que fomenta la autoagregación de las células y conduce a la formación de esferoides redondos en un período de tiempo relativamente corto. Células 3T3 de fibroblastos de ratón, sembradas a razón de 3000 células/pocillo, condujeron a la formación de esferoides redondos únicos en más del 95% de los pocillos. El tiempo relativamente corto requerido para la formación de esferoides y la baja variabilidad en la forma y el tamaño de los esferoides entre los pocillos hacen de estas placas una excelente opción de bajo costo y baja tecnología que se puede adaptar fácilmente a una plataforma de alto rendimiento para la respuesta a fármacos y las pruebas de toxicidad (9 ).
Referencias
1. Das, V.; Bruzzese, F.; Konečný, P.; et al. Modelos de tumores in vitro fisiopatológicamente relevantes para la detección de fármacos. Descubrimiento de drogas. Hoy 2015, 20, 848–855.
2. LaBarbera, DV; Reid, BG; Yoo, BH El modelo esferoide de tumores multicelulares para el descubrimiento de fármacos contra el cáncer de alto rendimiento. Opinión de expertos. Descubrimiento de drogas. 2012, 7, 819–830.
3. Monjaret, F.; Fernández, M.; Duchemin-Pelletier; et al. Producción en un solo paso totalmente automatizada de esferoides tumorales 3D funcionales para detección de alto contenido. J. Laboratorio. Automático. 2016, 21, 268–280
4. Wenzel, C.; Riefke, B.; Gründemann, S.; et al. Detección 3D de alto contenido para la identificación de compuestos que se dirigen a células en regiones esferoides de tumores latentes. Exp. Resolución celular. 2014, 323, 131–143.
5. Li, Q.; Chen, C.; Kapadia, A.; et al. Modelos 3D de transición epitelialmesenquimal en metástasis de cáncer de mama: desarrollo, validación y detección piloto de ensayos de detección de alto rendimiento. J. Biomol. Pantalla. 2011, 16, 141-154.
6. Berg, M.; Undisz, K.; Thiericke, R.; et al. Evaluación de las condiciones de manipulación de líquidos en microplacas. J. Biomol. Pantalla. 2001, 6, 47–56
7. Berthier, E.; Warrick, J.; Yu, H.; et al. Gestión de la evaporación para ensayos a microescala más sólidos. Parte 1. Pérdida de volumen en ensayos de alto rendimiento. Laboratorio. Chip 2008, 8, 852–859.
8. Walzl, A.; Kramer, N.; Mazza, G.; et al. Un método simple y rentable para evitar la evaporación desigual en ensayos de detección celular, que restaura la actividad metabólica celular. En t. J. Aplica. Ciencia. Tecnología. 2012, 2, 17–25. 9. https://facellitate.com/product/biofloat-384-well-plates/
